1、1. 切片常规脱蜡至水。

2、如需抗原修复，可在此步后进行2.缓冲液洗 3min/2 次。

3、3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

【资料图】

4、4. 缓冲液洗 5min/2 次。

5、5. 滴加 Ultra V Block ， 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

6、(注:孵育不要超过 10 分钟，否则会导致特异性染色降低。

7、如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清，这一步可以省略。

8、)6. 缓冲液洗 5min/2 次。

9、7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育1 - 2 小时。

10、(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)8. 缓冲液洗 5min/2 次。

11、9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子)，在室温下孵育 20 分钟。

12、10 .缓冲液洗 5min/2 次。

13、11 .滴加 HRP Polymer(酶标二抗) ，在室温下孵育 30 分钟。

14、(注:HRP Polymer 对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。

15、)12 .缓冲液洗 5min/2 次。

16、13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混匀后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分钟。

17、(具体时间由染色深浅决定。

18、)14 .自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

19、简介：免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

20、基本原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。

21、先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。

22、由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

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